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            如何選擇高質量ELISA試劑盒

            2022-06-20
            402次

            酶聯免疫吸附法(ELISA)是指將可溶性的抗原或抗體吸附到聚苯乙烯等固相載體上,進行免疫反應從而對液體生物標本中微量物質進行測定的定性和定量方法。

            檢測原理

            1、使抗原或抗體結合到某種固相載體表面,并保持其免疫活性。

            2、使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體,這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性,又保留酶的活性。在測定時,把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開,最后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。加入反應底物后,底物被酶催化轉化為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據顏色反應的深淺進行定性或定量分析。

            ELISA檢測具有靈敏度高、特異性強、操作簡單、樣本量少等特色,且檢測結果準確度高,重復性好,在臨床及科研的抗原抗體檢測及病原體檢測方面得到了廣泛的使用。目前市面上ELISA試劑盒品牌駁雜,檢測指標種類、別名繁多,產品質量參差不齊,我們應該怎么挑選適用的ELISA試劑盒產品呢?有哪些指標是需要我們考慮的呢?

            首先,客戶需要明確實驗目的是做靶標功能性測定還是含量檢測。功能性測定一般是酶及底物的反應,對生物活性的分析。而Elisa專用于靶標分子的含量檢測。

            其次,如果所研究指標為蛋白質或多肽,可以到Uniprot數據庫(https://www.uniprot.org/)查詢對應的的Uniprot ID,在選擇產品時同時核對指標名和Uniprot ID;如果所研究指標為小分子半抗原,此類化學物質可以到ChemSpider化學品庫(http://www.chemspider.com)查詢對應的CAS號,結合CAS號選擇需要的產品。

              然后,我們還需要根據已有文獻查詢或預判靶標在生物樣本中的有無或含量區間,針對性選擇靈敏度足夠的試劑盒,同時和廠商確認試劑盒的適用樣本是否包含客戶自己的實驗樣本。

              在此基礎上,如果客戶有多種品牌的同類產品可以選擇,還應比較試劑盒產品的多項性能參數,包括靈敏度、特異性、精密性、準確度、線性、穩定性、天然樣本數據。這些參數是ELISA作為一種人為建立的微量分析方法為確保其有效性和可信度所必須考量的內在固有的特性。

            1、靈敏度(sensitivity)試劑盒對于被檢物質的最低檢測能力,如果我們待檢物質濃度量很低,可以選擇高靈敏的試劑盒。靈敏度取值為空白對照的標準差對應的濃度值的3倍。

            FineTest擁有獨特的信號放大專利技術,能靈活調整試劑盒的靈敏度,最高可將靈敏度提高到fg級別,并有能力提高客戶樣品檢出率。

            2、特異性(Specificity)判斷其他分子與試劑盒抗體的結合能力。交叉反應越小,試劑盒的特異性越好。一般需要衡量試劑盒與當前種屬同家族蛋白和其它種屬該蛋白、血清中常見因子(如異嗜性抗體、類風濕性因子等)、靶蛋白互作蛋白無交叉反應。為保證試劑盒特異性,FineTest主要有這3方面的努力:

            2.1、從原料上精選單克隆抗體和多克隆抗體對;

            2.2、從反應溶液體系上優化包被緩沖液、樣本稀釋液和抗體稀釋液來抵抗基質效應;

            2.3、從測定物本身特性優化,天然抗原和重組蛋白抗原與捕獲抗體結合力的強弱由于結合后蛋白構象的改變而不同進而會影響檢測值的區別。

            3、精密性(Precision)也叫重復性,是對同一樣品重復測定時誤差大小的評估參數。一般要求板間及板內精密性控制在10%以內。

            FineTest使用全機器生產,排除人工的不穩定性,依靠電子移液槍和自動包板機精確加樣,嚴格控制批內差批間差。

            4、準確度(Recovery ) 一般通過加標(spike-in)回收率來衡量,回收率在80%-120%之間為合格。通過添加標準品到天然樣本機制內進行測定,以不添加標準品的天然樣本基質為空白對照,回收率數值為靶標的測定濃度與添加的標準品濃度比值,以百分比計?;厥章势呋蚱蜁a生假陽性或假陰性結果,影響測定值的準確性。

            Matix

            Recovery Range (%)

            Average (%)

            Serum(n=5)

            85-98

            93

            EDTA Plasma(n=5)

            88-100

            95

            Heparin Plasma(n=5)

            86-98

            93

            5、線性度(Linearity ) 在天然樣本基質中添加有適當濃度的標準品,分別稀釋2倍、4倍、8倍來檢測,測定各濃度下的回收率,回收率在80%-120%之間為合格。

            Sample

            1:2

            1:4

            1:8

            Serum(n=5)

            82-98%

            84-100%

            82-100%

            EDTA Plasma(n=5)

            80-104%

            90-102%

            86-97%

            Heparin Plasma(n=5)

            82-95%

            83-98%

            84-100%

            6、穩定性(Stability ) 一般以加速破壞性實驗進行驗證,將未拆封的試劑盒在37℃2-8℃分別放置一定時間,考察各項性能指標的偏差,以偏差小于10%為合格。穩定性越好,試劑盒存儲時間越長。

            FineTest自主開發的穩定系統可以讓試劑盒在40度的環境下存放一周,活性不低于95%。大部分試劑盒可以在4度存放兩年活性依然能保持85-95%?;静挥绊懺噭┖泄ぷ骱徒Y果的準確性。

            7、天然樣本檢測

              最后,還應明確試劑盒可以檢測天然樣本及合適的樣本類型。根據靶點性質預判適合檢測的樣本,并實際檢測該類樣本數量達到5例以上,在客戶需要時提供一定的樣本含量數據參考。在市場上,根據國內外各大科研院所科研人員和行業內廣大廠家的共識,ELISA試劑盒通常被分為低端、中端和高端三類,一般也是用這七項性能參數來區分的。優秀的ELISA試劑盒產品將極大地促進我們實驗進度,幫助我們拿到珍貴可靠的實驗數據。


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